NIBSC 06/206 人类乳头瘤病毒(HPV)18型DNA(第一国际标准)

产品名称:NIBSC 06/206 人类乳头瘤病毒(HPV)18型DNA(第一国际标准)

英文名称:Human Papillomavirus (HPV) Type 18 DNA (1st International Standard)

品牌:WHO国际标准品NIBSC

类别:国际标准

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06/206 1支 8周 3080 立即咨询

产品详情
- COA - MSDS


1. 预期用途

用于核酸检测的第一个 HPV 18 型 (HPV18) DNA 国际标准由冷冻干燥的重组质粒 pBR322 含有通过其独特的 EcoR1 位点克隆的全长 HPV18 DNA (Quint et al., 2006)。 EcoR1 克隆位点位于 E1 基因内。该标准已在纯化的人类基因组 DNA 的背景下配制,以 0.5 ml 等分试样冻干并在 -20 °C 下储存。该材料在一项涉及 19 个实验室的国际合作研究中进行了校准(Wilkinson 等人,2010 年)。国际标准包含第三方专有的材料,应仅用于内部校准或工作用于扩增和检测 HPV18 DNA 的标准。

本国际标准不得用于任何其他目的,并且使用后应丢弃。



2. 注意

NIBSC 06/206 人乳头瘤病毒18 型(标准品)

该制剂不适用于人类或动物人类食物链。

该材料含有源自 C33A 细胞的 DNA。和所有的一样生物来源的材料,该制剂应被视为对健康有潜在危害。它应该被使用和丢弃根据您自己实验室的安全程序。这样的安全程序应包括戴防护手套和避免产生气溶胶。应注意在打开安瓿或小瓶,以避免割伤。



3. 单元

HPV18 DNA 的第一个国际标准(NIBSC 代码 06/206)已被规定为每安瓿 5 x 10^6 国际单位 (IU) 的单位。



可追溯性声明:

它是在 2008 年 1 月的 WHO 会议上提出的(Ferguson 等人,

2009) HPV18 DNA 国际标准的使用说明包括用于确定用于制定国际标准的散装材料的理论 HPV18 基因组当量 (GEq) 的计算和假设,从而证明 1 IU 相当于 1 HPV18 DNA 的 GEq。因此,第一个 WHO HPV18 DNA 国际标准的最终统一仍然是 IU,而可追溯性声明将允许用户将 IU 等同于 GEq。


在新墨西哥大学 (UNM) 的 Cosette Wheeler 博士的实验室中进行了重组 HPV18 质粒储备制剂的 DNA 浓度测定。 DNA浓度通过260 nm处的吸光度以及使用Picogreen测定法(Invitrogen Corporation,USA)的分光荧光法测定。在两次 DNA 测量之间获得了 0.95 或更高的相关系数。事先为了递送至 NIBSC,将 HPV18 质粒储备制剂调整至 5 ng HPV18 质粒 DNA/μl 的终浓度。 UNM 实验室还向 NIBSC 提供了一份声明,表明 HPV18 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.27 ng/μl。因此,5 ng HPV18 质粒 DNA/ul 质粒储备液相当于 3.937 x 1011 HPV18 GEq/ml。 NIBSC 使用这些数据制定了 HPV 18 型 DNA 的第一个国际标准。


为第 1 个国际标准制定散装材料HPV 18 型 DNA(NIBSC 代码 06/206):

在 NIBSC,大块 HPV18 质粒 DNA 材料是根据公式:

HPV GEq/ml 散装材料 = (HPV GEq/ml 质粒原液 x 体积质粒原液)/体积散装材料。

因此,HPV18 GEq/ml 散装材料 = (3.937 x 1011 HPV18 GEq/ml 质粒原液) x (0.04826 ml HPV18 质粒原液) / 1900 ml HPV18 散装材料 = 1.0 x 107 HPV18 GEq/ml 散装材料随后将 HPV18 DNA 散装材料以 0.5 ml 等分试样冷冻干燥。



第一次将 IU 等同于 GEq 需要某些假设HPV18 DNA 国际标准: 1) HPV18 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.27 ng/μl; 2) 冻干后 HPV18 DNA 的活性没有损失; 3)重组HPV18质粒DNA准确模拟了生物样本中HPV18病毒DNA的活性。

独立计算重组 HPV18 质粒的 GEq/ml脱氧核糖核酸。

NIBSC 还使用 BioEdit 序列比对编辑器 v7.0.5.3 (Tom Hall, Isis 制药公司,美国)。用于确定分子量的序列是 GenBank

pBR322 的登录号 J01749.1 和参考序列 HPV18(登录 X05015)。



生物编辑数据DNA分子:HPV18登录X05015

长度 = 7857 个碱基对

MW= 4763530.00 道尔顿,双链

DNA分子:克隆载体pBR322

长度 = 4361 个碱基对

MW= 2653867.00 道尔顿,双链



公式

根据以下公式计算 HPV 质粒原液的 GEq/ml:

HPV 质粒原液的 GEq/ml = (HPV 质粒原液的 DNA 浓度) x (HPV DNA 的 MW + pBR322 的 MW)-1

x (阿伏伽德罗数) 其中阿伏伽德罗数 = 6.022x1023 分子/mol GEq/ml 大量 HPV DNA 材料根据以下公式计算:

HPV GEq/ml 散装材料 = (HPV GEq/ml 质粒原液 x 体积质粒原液)/体积散装材料。



计算

将重组 HPV18 质粒原液提供给 NIBSC浓度为 5 ng/μl,因此 HPV18 质粒的 GEq/ml库存是:

= (5 x 10-9

g/μl) x (mol/(7417397 g) x (6.022x1023 分子/mol)

= 4.059 x 108 分子/μl

= 4.0591 x 1011 分子/ml

= 4.059 x 1011

HPV18 GEq/ml

将 48.26μl 重组 HPV18 质粒原液稀释至终体积为 1900ml,因此:

HPV18 GEq/ml 散装材料 = (4.059 x 1011 HPV18 GEq/ml 质粒原液) x (0.04826 ml HPV18 质粒原液) / 1900 ml HPV18 散装材料= 1.031 x 107 HPV18 GEq/ml 散装材料


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NIBSC 06/206 人乳头瘤病毒18 型(标准品)


4. 内容

生物材料原产国:英国。


每个安瓿含有 0.5 ml HPV18 质粒 DNA 的冻干当量,稀释在 10 mM Tris 缓冲液 pH7.4 中,含有 1 mM EDTA、5 mg/ml 海藻糖和约 1 x 106 人 Geq/ml C33a 细胞。


5. 存储

收到时,安瓿瓶应存放在 -20 °C 或以下。

请注意:由于冻干材料固有的稳定性,NIBSC 可能会在环境温度下运输这些材料。



6. 开瓶指南

DIN 安瓿瓶有一个“易开”颜色的压力点,窄的安瓿杆在此与较宽的安瓿瓶主体相连。各种类型的安瓿破碎机可商购获得。要打开安瓿,轻轻敲击安瓿以收集底部(标记)末端的材料,然后按照安瓿随附的制造商说明进行操作



7. 材料的使用

在重新配制之前,不应尝试称量冻干材料的任何部分。

HPV18 DNA 的第一个国际标准包含高拷贝数模板。 HPV18质粒的风险很高,打开玻璃安瓿时通过雾化造成 DNA 污染。材料必须在单独的实验室环境中打开和处理,远离试剂、实验室器具和样品等其他预放大组件。



该材料以冻干形式提供,使用前应在 0.5 ml 无菌无核酸酶水中复溶。确保安瓿的内表面被添加的水润湿,以便重组粘附在玻璃上的任何冻干材料颗粒。

重组材料的最终浓度为 1 X 10^7 IU/mL。


重组材料适用于校准内部或工作标准,用于扩增和检测 HPV18 DNA(WHO/IVB/10.12)。该材料不应用于校准或评估提取、沉淀或离心程序。 NIBSC 可以为在提取步骤无法与扩增步骤分离的分析中使用 06/206 提供指导(例如进样、应答平台)。该材料尚未针对人类 DNA 核酸扩增技术进行校准。


NIBSC 06/206 人乳头瘤病毒18 型(标准品)




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