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抗人IgG单克隆抗体RM8671的分子量分析

作者:东莞市中亿生物科技有限公司   日期:2022-11-28

抗人IgG单克隆抗体RM 8671是一种在鼠悬浮培养中表达的重组人源化 IgG1κ,并经过生物制药行业标准的上游和下游纯化,以去除工艺相关的杂质。它是通过链间和链内二硫键连接的两条轻链和两条重链亚基的约 150 kDa 同源二聚体。抗人IgG单克隆抗体RM 8671分子具有高丰度的 N 末端焦谷氨酰胺化、C 末端赖氨酸剪切和重链糖基化。该蛋白质还具有低丰度的翻译后修饰,包括蛋氨酸氧化、脱酰胺和糖化 [1-4]。


抗人IgG单克隆抗体RM 8671完整分子量分析

质谱电喷雾离子化源( ESI)可以使完整抗体蛋白带多个电荷,从而将质荷比(m/z)降至质谱仪可监测的范围内。而对带多电荷的蛋白质谱谱图进行去卷积处理是完整蛋白质分子量测定的首选方法,其与高分辨率质谱仪一起使用时,可区分抗人IgG单克隆抗体糖型与其它翻译后修饰(PTM)。在进入质谱仪之前,色谱分离可用于提高基于MS的完整检测的通量和灵敏度。反相高效液相色谱(RP - HPLC)和尺寸排阻色谱(SEC)都已成功用于完整的mAb分离检测[;]。本研究将上述方法应用于抗体对照品的分析中,并将实测的分子量与理论分子量进行比较。

mAb的完整分子量解析如表1及图1所示。图1A显示,抗人IgG单克隆抗体完整蛋白所带电荷状态良好。综合表1和图1B可知,mAb的主峰(4号峰)是重链上携带的两个COF;部分重链(5号峰)含有COF/G1F,相对比例为18.3%;小部分抗体两条重链(6号峰)携带GIF糖型,其比例为3.1%。相对比例为6.9%的重链(2号峰)携带COF/COF(COF掉一个HexNAc),极少部分(1.4%)重链(1号峰)携带的COF/COF掉2个HexNAc。可见此抗体的主要糖型是GOF与GIF。3号峰未解析出,从图1B插图可得,其匹配的是主峰的部分,即此峰为主峰的一部分,此现象可能是去卷积ReSpect算法导致的。

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