重组人CKMM同工酶ERM-AD455在不同保存基质中的稳定性和互通性观察：

重组酶应用时对其稳定性有严格的要求。研 究对酶溶液 -20℃ 冷冻保存的稳定性做了初步观 察,发现未加稳定剂时重组酶活性丧失很快。在含 有 ＢＳＡ、ＤＴＴ和 ＥＤＴＡ的基质中保存于 -20℃或在 具以上稳定剂基质中加入抗冻剂丙二醇,重组 CKMM同工酶的稳定性相对较好,仿 ＣＲＭ 配方基质中重组酶 的短期 稳 定 性 也 较 好,保 存 时 间 与 Ｒｏｃｈｅ公 司 产 ｃｆａｓ校准品复溶后冷冻保存稳定时间接近。一般认 为人血清作为参考品基质其基质效应小，研究将 重组CKMM同工酶保存于人血清中,稳定性不好,可能是 人血清中含有蛋白水解酶或抑制物等,更易造成酶 失活。酶的CKMM同工酶ERM-AD455都是冻干品,其稳定期长,以冻干 品的形式长期保存酶参考品应该是可行的方法。

 罗氏和中生北控 ＣＫ常规测定方法对 ＩＦＣＣ参 考方法做相关回归发现,无论在 CKMM同工酶还是在 ＣＫ- ＭＢ升高组常规方法与参考方法间具良好的两两相 关性,相关系数大于 0.99。但两组样本用罗氏方法 测定的结果比参考方法分别偏高 1.96%和 2.23%, 而中生 北 控 的 方 法 的 测 定 值 比 参 考 方 法 分 别 低 8.63%和 10.29%。显 然,经 过 溯 源 校 准 的 罗 氏 试 剂测定的准确度明显优于只 采 用 Ｋ值 输 入 而 未 经校准品校准的中生北控国产试剂。 

研究观 察 了 保 存 于 自 配 基 质、抗 冻 基 质、仿 CKMM同工酶ERM-AD455配方基质和人血清基质中重组 CKMM同工酶的互通 性。结果自制基质和仿 ＣＲＭ配方基质中的重组酶, 在高、中、低不同水平时都具有良好的互通性,而抗 冻基质和人血清基质配方中的重组酶只有位于诊断 限附近的低值有互通性。我们对重组酶的酶动力学 研究发现,底 物 磷 酸 肌 酸 的 米 氏 常 数 (Ｋｍ)重 组 酶 明显高于天然酶,因此在现有测定方法下重组酶的 测定上限低于天然酶,这可能是高浓度值互通性差 的重要原因之一 。

综合对重组酶稳定性和互通性的研究发现,加 入稳定剂的类人血清自制基质和仿 CKMM同工酶ERM-AD455 配方基质 中保存的重组酶具有较好的应用前景。为保证其稳 定性,需进一步制备冻干品,并观察冻干品在不同保 存温度的稳定性。该重组酶真正作为 ＣＫ候选参考 物质应用于临床还有许多问题需要解决,包括冷冻 干燥品复溶后的稳定性和互通性,将此重组酶作为 参考品并予以赋值用于常规测定的校准 能否减 小室间变异等,都需要进一步观察。

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